基因工程（四）

(23).基因文库包含：

<1>.基因组文库：包含一种生物的所有基因。

<2>.部分基因文库（如cDNA文库）：包含一种生物的一部分基因。

(24).cDNA是用某种生物发育的某个时期的mRNA逆转录产生的多种互补DNA片段，没有启动子和内含子，可以进行物种间的基因交流。

(25).DNA探针是根据目的基因的核苷酸序列制成的与之互补的核苷酸短链，用同位素标记，便于从基因文库种获取目的基因，原理是碱基互补配对。

(26).DNA探针分为：

<1>.基因组探针：来自基因组中有关的基因本身，含内含子。

<2>.cDNA探针：从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到，不含内含子。

<3>.寡核苷酸探针：人工合成。

(27).除了从已知碱基序列的基因里筛选，还可以人工合成目的基因：

<1>.逆转录法：主要用于相对分子质量较大而又不知其核苷酸序列的基因。它以目的基因的mRNA为模板，借助逆转录酶逆转录得到单链DNA，最终合成双链DNA。

<2>.化学合成法：用于相对质量较小且已知其核苷酸序列的基因。依据某一蛋白质的氨基酸序列，推测出其基因序列，然后直接合成目的基因。（氨基酸序列→mRNA核苷酸序列→目的基因核苷酸序列→目的基因）

(28).利用化学合成法合成的目的基因不止一种的原因：

<1>.遗传密码具有简并性。

<2>.一种氨基酸可能由多个密码子决定。

(29).人工合成的目的基因不含内含子和启动子等非编码序列，长度较短。

(30).逆转录法需借助逆转录酶（逆转录mRNA），化学合成法专一性更强。

(31).切割目的基因常用双酶切法（用两种不同的限制酶分别切割目的基因和载体的两端），该法利于载体与目的基因的正确结合，避免反向连接和其自身环化，提高了连接的有效性。

(32).微生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质较少等。

(33).农杆菌转化法：将目的基因插入Ti质粒的T-DNA（可转移的DNA）上。

(34).花粉管通道法：在植物授粉后剪去柱头，将DNA滴加在柱头切面上。

(35).Ca2+处理法：Ca2+（常用氯化钙溶液）增加受体细胞细胞膜的通透性，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（感受态）后，将重组表达载体与其混合。（导入感受态细胞的必须是重组DNA分子）

(36).农杆菌内含有Ti质粒，在农杆菌侵染植物细胞后能将其上的T-DNA转移到被侵染的细胞并将其整合到该细胞的染色体DNA上。