基因工程（五）

(37).对目的基因进行分子水平的检测：

<1>.目的基因是否插入受体细胞的DNA/转录出mRNA：PCR技术。

<2>.目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术。

(38).对目的基因进行个体水平的检测：如给抗虫棉接种害虫等。

(39).DNA鉴定的原理：在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈蓝色。（冷却后在观察颜色变化）

(40).提取DNA可用洋葱（研磨以破碎细胞壁）或鸡血细胞（加清水令其涨破）。

(41).研磨液过滤离心后取上清液加入等体积、体积分数为95%的冷酒精溶液的原因：

<1>.低温抑制核酸水解酶活性防止DNA降解。

<2>.低温降低分子运动速度，是DNA易形成沉淀析出。

<3>.低温增加DNA分子柔韧性防止或减少DNA断裂。

<4>.DNA分子不溶于冷酒精，但某些蛋白质溶于酒精。

(42).DNA鉴定时加2mol/L NaCl溶液的原理：DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度（和变形温度）不同，其可溶于2mol/L NaCl溶液。

(43).蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，变性温度也不同。

(44).PCR是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。

(45).对于同一目的基因而言，通过cDNA和PCR过程获得的目的基因结构不完全相同。

(46).高质量的DNA模板是成功扩增出目的基因的前提条件之一，在制备高质量DNA模板时必须除去蛋白质，方法有盐析法、酶解法或高温变性。

(47).PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活，因此PCR反应缓冲溶液一般要添加Mg2+。

(48).参与DNA复制的组分：

<1>.解旋酶（体外用高温代替）：打开DNA双链。

<2>.DNA母链：提供打开DNA复制的模板。

<3>.4种脱氧核苷酸（dNTP）：合成DNA子链的原料。

<4>.DNA聚合酶（耐高温）：催化合成DNA子链，一般选用Taq酶。

<5>.2种引物：分别与两条模板链结合，使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。

(49).引物使一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物长度通常为20～30个核苷酸。

(50).设计引物时要避免引物自身内部部分碱基发生互补配对或两种引物之间局部发生碱基互补配对导致引物失效。